巨噬細(xì)胞清除劑（如氯膦酸二鈉脂質(zhì)體，Clodronate Liposomes，貨號CP-005-005，荷蘭Liposoma）用于清除體內(nèi)特定組織的巨噬細(xì)胞后，通過回輸（Adoptive Transfer）修飾或來源特定的巨噬細(xì)胞，是研究巨噬細(xì)胞功能的經(jīng)典實驗策略。其核心在于精確控制清除與回輸?shù)臅r間窗口，確保原位巨噬細(xì)胞被有效清除，而回輸?shù)募?xì)胞能存活并發(fā)揮功能。

關(guān)鍵實驗要素

?清除劑選擇與給藥?

•腹腔注射?：常用于清除腹腔巨噬細(xì)胞，典型劑量為200 µL?。

•氣管內(nèi)給藥 (i.t.)?：用于清除肺泡巨噬細(xì)胞，例如在哮喘模型中，常用40 µL/次，連續(xù)給藥2天?。

•尾靜脈注射?：常用于清除肝臟等全身性巨噬細(xì)胞，或用于回輸細(xì)胞?。

•常用試劑?：荷蘭Liposoma公司生產(chǎn)的氯膦酸二鈉脂質(zhì)體（貨號CP-005-005）是廣泛使用的成熟試劑，通過巨噬細(xì)胞的內(nèi)吞作用誘導(dǎo)其凋亡?12。

•給藥方式?：根據(jù)目標(biāo)組織選擇不同的給藥途徑：

?回輸時間點?
回輸時間點是實驗成功的關(guān)鍵，需在清除劑效果達(dá)到峰值且其藥效基本消退后進(jìn)行，以避免回輸細(xì)胞被二次清除。

?•腹腔清除后?：通常在清除劑注射后?72小時?回輸細(xì)胞?。

•肺泡清除后?：在末次清除劑給藥后?24小時?回輸細(xì)胞?。

•?肝臟清除后?：清除后約?48小時?進(jìn)行回輸?。

?回輸細(xì)胞質(zhì)控?

•細(xì)胞類型?：可以是骨髓來源的巨噬細(xì)胞（BMDMs）、腹腔巨噬細(xì)胞（pMacs）或從特定基因敲除小鼠（如CD1d-KO）中分離的細(xì)胞?。

•回輸數(shù)量?：根據(jù)實驗?zāi)Ｐ秃徒o藥途徑調(diào)整，例如腹腔回輸常用3×10?個細(xì)胞?，肺泡回輸常用5×10?個細(xì)胞?2。

•回輸方式?：通常與清除途徑一致，如腹腔注射、氣管內(nèi)注射或尾靜脈注射?。

核心應(yīng)用與發(fā)現(xiàn)?
此技術(shù)被廣泛應(yīng)用于探究巨噬細(xì)胞在疾病中的作用。例如，有研究利用該技術(shù)發(fā)現(xiàn)，缺乏CD1d分子的巨噬細(xì)胞會因脂質(zhì)代謝重編程而對炎癥刺激反應(yīng)更強，揭示了CD1d在調(diào)控巨噬細(xì)胞代謝與免疫反應(yīng)中的關(guān)鍵作用?。

?總結(jié)?：巨噬細(xì)胞清除與回輸是一個精密的兩步實驗流程。成功的關(guān)鍵在于?根據(jù)目標(biāo)組織選擇合適的清除劑給藥方式，并嚴(yán)格遵循經(jīng)文獻(xiàn)驗證的、針對該組織的理想回輸時間窗口?（通常為清除后24-72小時），同時確保回輸細(xì)胞的數(shù)量、活力和純度。

骨髓嵌合小鼠巨噬細(xì)胞回輸模型，可以參考如下nature communications文獻(xiàn)。

用于骨髓嵌合實驗的10–12周齡雌性C57BL/6J小鼠接受9.5?Gy的照射。次日，從供體小鼠體內(nèi)在無菌條件下分離骨髓并通過靜脈注射給予受體小鼠。在照射后第10天，使用氯膦酸脂質(zhì)體處理小鼠以清除組織駐留的巨噬細(xì)胞。經(jīng)過50天的骨髓重建后，小鼠即可用于實驗。

論文信息：

論文題目：Acid ceramidase of macrophages traps herpes simplex virus in multivesicular bodies and protects from severe disease

期刊名稱：Nature Communications

時間期卷：11, Article number: 1338(2020)

在線時間：2020年3月12日

DOI： doi.org/10.1038/s41467-020-15072-8

產(chǎn)品信息：

貨號：CP-005-005

規(guī)格：5ml+5ml

品牌：Liposoma

產(chǎn)地：荷蘭

名稱：Clodronate Liposomes& Control Liposomes

辦事處：Target Technology(靶點科技)

Clodronate Liposomes氯膦酸鹽脂質(zhì)體清除病毒模型中巨噬細(xì)胞 ，荷蘭Liposoma巨噬細(xì)胞清除劑ClodronateLiposomes見刊于Nature Communications：巨噬細(xì)胞的酸性神經(jīng)酰胺酶將單純皰疹病毒困在多囊泡體中，并防止嚴(yán)重疾病。

Liposoma巨噬細(xì)胞清除劑Clodronate Liposomes氯膦酸二鈉脂質(zhì)體清除腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的材料和方法：

Reagents

D-erythro-sphingosine (C18, 860490) and D-Galactosyl-β1-1’-N-Nervonoyl-D-erythro-sphingosine (C24:1, β-D-Galactosyl Ceramide, 110759), were obtained from Avanti Polar Lipids (Alabaster, AL, USA). Glycoceramidase (E9030-100MUN), sphingomyelinase (S8633-25UN), Cy3-linked DBCO (777366-1?mg) and DAPI (D9542) were purchased from Millipore Sigma (Darmstadt, Germany). Recombinant mouse Asah2 (3558-AH) was purchased from R&D Systems (Minneapolis, MN, USA). The sphingosine kinase inhibitor SKI-II (CAS # 312636-16-1; Cat # 2097) was obtained from Tocris Bioscience (Bristol, United Kingdom) and tamoxifen (CAS # 10540-29-1, Cat # T5648-5G) and cornoil (CAS # 8001-30-7, Cat # C8267-500ML) from Millipore Sigma. Clodronate and control liposomes were purchased from Liposoma (CP-005-005, Amsterdam, Netherlands). Clickable ω-azido-sphingosine ((2S,3R,E)-2-amino-18-azidooctadec-4-ene-1,3-diol) for click chemistry42 staining was synthesized in-house by Julian Fink.

Depletion of macrophages

For macrophage-depleted mouse experiments, mice were treated intravenously with 50?mg/kg clodronate to deplete tissue resident macrophages. After 3 days, mice were ready to be used in experiments.

材料和方法文獻(xiàn)截圖：